Etablierung und Evaluierung der quantitativen Bestimmung von Homocystein und den Metaboliten Cystathionin, Methylmalons├дure und 2-Methylzitronens├дure im Serum mittels Gaschromatographie-Massenspektrometrie

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Inhaltsangabe:Zusammenfassung: Die Hyperhomocystein├дmie (>15 ╬╝mol/l) ist ein unabh├дngiger Risikofaktor zur Entwicklung einer Atherosklerose. Eine Konzentrationsbestimmung im Serum ist bei Personen mit einem erh├╢hten Risiko zur Entwicklung atherothrombotischer Ereignisse sinnvoll. Homocystein (HC) steht im Stoffwechselzusammenhang mit Cystathionin (Cys), Methylmalons├дure (MMA) und 2-Methylzitronens├дure (MC), wobei die Metabolisierung an die Vitamine B 6, B 12 und Fols├дure gekoppelt ist. Hauptursachen der Erh├╢hung von HC und seiner Metabolite im Serum sind Mangelzust├дnde an den oben genannten Vitaminen, die chronische Niereninsuffizienz sowie genetische Defekte. Da die Konzentrationen der Metabolite auch bei normalen Serumvitaminspiegeln erh├╢ht sein k├╢nnen, gelten die genannten Substanzen als Marker eines funktionellen, intrazellul├дren Vitaminmangels. Die Konzentrationsbestimmung erm├╢glicht dar├╝berhinaus eine Differenzierung der betroffenen Stoffwechselwege und Vitamindefizite. Die kombinierte Messung von HC und seinen Metaboliten Cys, MMA und MC mit seinen Diastereomeren ist nur mittels Gaschromatographie-Massenspektrometrie m├╢glich. In der Literatur gibt es bisher nur aus der Arbeitsgruppe von Allen et al. Mitteilungen ├╝ber die simultane gaschromatographisch-massenspektrometrische Bestimmung von HC, Cys, MMA und MC. Mit der Etablierung und Evaluierung der Methoden ist die quantitative Bestimmung der genannten Substanzen an der Friedrich-Schiller-Universit├дt Jena m├╢glich geworden. F├╝r alle Metabolite konnte eine Nachweisbarkeit im Bereich physiologischer Serumkonzentrationen erzielt werden. Der Intra-Assay-Variationskoeffizient des HC-Assays betrug 3,9% in Konzentrationen zwischen 20 und 58 ╬╝mol/l, bei Wiederfindungsraten von im Mittel 100%. Der Inter-Assay-Variationskoeffizient der Konzentration von 15,6 ╬╝mol/l lag bei 4,5%. Der Inter-Assay-Variationskoeffizient im Ringversuch 1999 lag bei 3% mit einer mittleren Wiederfindung von 94% bei Konzentrationen von 9, 11,6 ,13,7 ,18,5 und 37,1 ╬╝mol/l. F├╝r die Cys-Bestimmung wurde ein Intra-Assay-Variationskoeffizient von 1,8% mit durchschnittlichen Wiederfindungsraten zwischen 100% und 106% ermittelt (Konzentrationen von 700-1900 nmol/l). Der Inter-Assay-Variationskoeffizient betrug 7% bei 1178 nmol/l. MMA wurde mit einem Intra-Assay-Variationskoeffizienten von im Mittel 1,25%, Wiederfindungsraten von 98-102% (Konzentrationen von 240-1300 nmol/l) und einem Inter-Assay-Variationskoeffizienten von [...]

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